人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM+10%FBS+1%P

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养液

备注：用于无菌离心管收集培养基，以作过渡对比。如对比培养效果不佳，建议直接采购我们环亚集团·AG88的完全培养基。

二、细胞收到后处理

培养至良好状态后，灌满完全培养液并认真封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作，并将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行处理。显微镜下观察细胞生长状态，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基并放回37℃、5%CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后添加超过5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重新添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，进行显微镜观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放置于-80℃冰箱，若后期要转入液氮罐，则需在-80℃下保存24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护装备），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无冰晶形成，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，将其接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而发生脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟。收集上清后，可进行过渡培养（后期的对比培养），再加入胰蛋白酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基以终止反应。再进行离心处理，完成后按1:2的比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况：

1. 细胞运输期间发生的各种问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
2. 如细胞出现污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经过核实后可以重发。
3. 如常温发货的细胞在静置24小时后，或干冰冷冻发货的细胞复苏后24小时内，若检测大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可申请重发。
4. 若干冰冷冻发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞在静置4小时并且未开封的情况下出现污染，亦可重发。
5. 细胞活性问题请于收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照后备档，若三天内未告知，视为产品合格。若在4-7天内出现问题且提供收到细胞前3天的照片及操作的详细步骤与技术人员沟通后，由技术人员判断是否我方责任，若属我方责任将进行重发。
7. 如技术人员认定为双方责任，将由双方进行协商处理，或按合同价的50%收费进行重发。

2）细胞出现问题的不予重发情况：

1. 因客户操作不当造成细胞污染的，不予重发。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不佳的，不予重发。
3. 因非我方推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳的，不予重发。
4. 细胞状态不佳，且未提供培养前3天的照片的，不予重发。
5. 细胞培养过程中经过其他处理的，不予重发。
6. 接收细胞后2天内未告知的，不予重发。
7. 具体情况将视情况而定。

如需进一步了解，欢迎访问环亚集团·AG88，我们将竭诚为您提供支持与服务。